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甲型H1N1流感实验室诊断探秘

本文已为患者解决问题
2017-07-16

 2009年4月末以来,一种新型甲型H1N1流感病毒在世界范围内爆发流行,通过实验室对新型甲型H1N1流感病毒进行确认,对于病例管理、疾病的预防与控制以及抗生素的合理应用均具有重要的意义,可以做到 “早发现、早报告、早诊断、早隔离、早治疗”。早期、快速发现感染者,可有效防止可能发生的疫情蔓延。目前检测呼吸道标本中的甲型H1N1流感病毒核酸是快速诊断的唯一方法。


流感病毒是一种RNA病毒,属正粘病毒科,根据核蛋白(NP)和基质蛋白(MP)不同,可将流感病毒分3型:甲(A),乙(B),丙(C)型。根据膜糖蛋白血凝素(H)和神经氨酸酶(N)2种蛋白特性的差异,又可将流感病毒进一步分为多个亚型。目前甲型流感病毒H有16个亚型,N有9个亚型,人类流感流行的主要致病亚型为:人源甲型H1N1、H3N2、H1N2。

  在电子显微镜下观察:流感病毒外表粗糙,具有多形性,多次传代后直径为80~120纳米。大家都听说过“纳米技术”和“纳米产品”,1纳米是1厘米的百万分之一,我们肉眼根本不可能看到。那么,实验室是怎样在短短的几个小时内将流感病毒检测出来的呢?这就需要逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,这种技术是诊断新型甲型H1N1流感病毒感染的最及时有效的实验室检测方法,它检测的是甲型H1N1流感病毒的核酸。

  聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断。PCR技术不仅应用于临床医学,还广泛应用于法医学,这种技术能从犯罪嫌疑人留下的蛛丝马迹,比如一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA,供分析和鉴定,最终使嫌疑人伏法。

  聚合酶链反应(PCR)的原理及做法其实不难,它是利用DNA双链复制的原理,将DNA序列不断加以复制,使其数量以几何级数方式增加。PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此PCR成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。

  逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)是用来扩增RNA的方法。因为流感病毒是RNA病毒,所以必须先经反转录酶的作用从RNA反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。

  用于甲型H1N1流感病毒核酸检测的样本可以是鼻拭子、鼻咽拭子、咽拭子、口腔含漱液、鼻咽或气管抽取物、痰等。实验室在接到患者样本后,首先进行病毒核酸的提取,然后进行RT-PCR检测,试验过程大约需要6~8小时。

  这次甲型H1N1流感的爆发流行对实验室检测能力是极大的考验,实验室不仅要具备病毒核酸检测相应的硬件设施,更需要具备高水准的实验技术人员,这样才能保证检测结果快速与准确。

  从2009年5月初开始甲型流感检测至今,北京朝阳医院感染科微生物室经历了严格的考验。为了保证尽快出结果,检测工作经常都是争分夺秒地完成,实验技术人员24小时值班进行病毒核酸检测工作。五一节、端午节、儿童节、所有的周末,都贡献给了检测工作。实验室技术人员没有休息时间,也放弃了和家人团聚的机会。同时还要注意实验室的生物安全,人员防护。工作人员在进行操作时要穿防护衣、戴口罩、手套、帽子、鞋套等,在这样的穿戴之下工作,呼吸憋气,再加上夜班的困倦,强度可想而知,这项工作确实是对实验室检测能力以及实验技术人员能力的挑战,而我们也正是在这个过程中不断地提高自己,磨练自己,这是我们的工作,也是我们的骄傲,因为我们知道强大的实验室检测能力是早发现、早报告、早诊断、早隔离、早治疗的技术保证。


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